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蛋白质内的色氨酸残渣受紫外线激发可产生本征荧光。当蛋白质从折叠的自然状态进入变性状态的时候,发射光谱将轻微变化,反映了折叠构型的变化。
目的:
测定溶菌酶中处于天然态和变性状态色氨酸的本征荧光。
为了进行这个分析,对溶菌酶的天然和变性状态本征荧光进行了测量。溶菌酶为14.3 kDa 蛋白质,具有6色氨酸残基。色氨酸的激发波长为280 nm,发射波长350 nm。
实验条件:
下列样品送交分析:
将数毫升的溶菌酶溶液转移到一个石英试管,光程长1 cm。用UV-LVF-L滤光片使激发一侧300 nm以下的光通过。同时对缓冲剂的荧光进行了测量,以确保它们在使用条件下不发出荧光。
使用的硬件:
实验参数:
测量模式:
结果:
图1为天然和变性的溶菌酶溶液和缓冲剂测量的荧光光谱。注意:与蛋白质的折叠状态相关的荧光存在轻微的频变。
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